Western Blot（WB，蛋白质印迹法）原理及实验操作｜新手小白保姆级教程！
作者: EnkiLife
作者简介: Life is now and future.
描述: WB（Western Blot）是一种用于检测特定蛋白质的实验室技术，结合了凝胶电泳（如SDS-PAGE）和免疫检测（使用抗体），能够检测和量化样本中的特定蛋白质。以下是Western Blot的基本步骤： 1. 样本准备 细胞或组织裂解：将细胞或组织样本裂解，释放蛋白质。 蛋白定量：使用Bradford法或BCA法等方法测定蛋白浓度，确保各样本蛋白上样量一致。 2. 蛋白质分离 SDS-PAGE电泳：将样本中的蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳分离，根据分子量大小将蛋白质分离开。 3. 转膜 转膜：将分离的蛋白质从凝胶转移到固相支持物（如硝酸纤维素膜或PVDF膜）上。 4. 封闭 封闭膜：用封闭液（如5%脱脂奶粉或BSA）封闭膜上的非特异性结合位点，防止抗体非特异性结合。 5. 一抗孵育 一抗孵育：将膜与特异性一抗孵育，一抗与目标蛋白质结合。 6. 洗涤 洗涤膜：用洗涤缓冲液（如TBST）多次洗涤膜，去除未结合的一抗。 7. 二抗孵育 二抗孵育：将膜与二抗孵育，二抗与一抗结合。二抗通常与辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP）等酶连接。 8. 再次洗涤 再次洗涤膜：用洗涤缓冲液多次洗涤膜，去除未结合的二抗。 9. 化学发光检测 化学发光底物：将化学发光底物（如鲁米诺）加入到膜上，酶催化底物产生化学发光反应。 成像：使用成像系统（如CCD相机）捕获发光信号，生成蛋白质条带的图像。 10. 分析 分析条带：通过分析条带的强度和位置，确定目标蛋白质的表达水平和分子量。
